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關(guān)于人ELISA試劑盒研制功能研究
更新時間:2013-11-06   點(diǎn)擊次數(shù):864次

   在優(yōu)化免疫學(xué)反應(yīng)前提后,建立了克百威間接競爭ELISA法和直接競爭ELISA法,檢測限分別為0.005mg/L和0.01mg/L,檢測線性范圍分別為0.005~10mg/L和0.01~10mg/L,并在此基礎(chǔ)上研制了兩種用于檢測水、泥土、蔬菜、中毒樣品的酶聯(lián)免疫試劑盒,人ELISA試劑盒其ELISA試劑盒的重現(xiàn)性好,批內(nèi)批間及整體變異系數(shù)均低于8.0%,試劑盒檢測的正確度高,除嘔吐物樣品外,其余樣品的回收率均在89.62%以上。
本研究以2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃氯甲酸酯為基礎(chǔ)合成了克百威的兩種半抗原,6—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]已酸(BFNH)和4—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)。 用合成的克百威免疫原免疫兔子后獲得價、高特異性的抗克百威多克隆抗血清,用間接ELISA測定效價為1:16000~1:128000,純化抗體效價為1:500000~1:4000000。并選擇由BFNB-BSA免疫兔子所得的一種純化抗體與辣根過氧化物酶偶聯(lián)制備成酶標(biāo)抗體,人ELISA試劑盒同時了測定了酶標(biāo)抗體的活性,效價為1:4000。所得克百威多抗血清與丁硫克百威的交叉反應(yīng)率6.19%,與呋喃酚的交叉反應(yīng)率為4.00%,與供試的其它5種氨基甲酸酯類的交叉反應(yīng)率均小于0.44%,對于三種有機(jī)磷的交叉反應(yīng)率均低于0.12%。 同時,根據(jù)抗體抗原的特異性結(jié)合反應(yīng)的原理,進(jìn)一步研究了抗克百威抗體對小鼠克百威中毒后的解毒作用,試驗(yàn)結(jié)果表明,抗體可以較好地緩解克百威對乙酰膽堿酯酶按捺作用的癥狀,人ELISA試劑盒使中毒小鼠逐漸恢復(fù)正常。同時將這兩種半抗原與載體蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)合成克百威免疫原和包被抗原,并用紫外光譜法測定克百威與載體蛋白結(jié)合物結(jié)合比。

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