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ELISA檢測試劑盒結(jié)果準確可靠的必要條件
更新時間:2013-12-26   點擊次數(shù):1082次

    的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件。

    ELISA檢測試劑盒的操作因固相載體的形成不同而有所差異,國內(nèi)醫(yī)學檢驗一般均用板式點。

    本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點,ELISA檢測試劑盒珠式、管式及磁性球ELSIA,國外試劑均與特殊儀器配合應用,嚴格遵照規(guī)定操作,必能得出準確的結(jié)果。

    可用作ELISA測定的標本十分廣泛,體液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體 或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清 、尿液),有些則需經(jīng)預處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外,在醫(yī)學檢驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA中血漿和血清可同等應用。

    血清標本可按常規(guī)方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。

    血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,ELISA檢測試劑盒菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應。如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA檢測試劑盒中可使本底加深。

    一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清

    融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫入x心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體 效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑(見3.2.4)。

    按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾 水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。

    在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。

    加標本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。ELISA檢測試劑盒每次加標本應更換吸嘴,以發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清,可在試管 中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其加入血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應用液和底物用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。

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