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蛋白試劑盒的優(yōu)點(diǎn)及使用方法
更新時(shí)間:2021-12-21   點(diǎn)擊次數(shù):1375次
   BCA蛋白試劑盒是進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度測定的常見的方法之一。BCA蛋白定量的主要原理是:蛋白質(zhì)在堿性條件下,可以將二價(jià)Cu2+離子還原成一價(jià)Cu+離子。產(chǎn)生的一價(jià)Cu+離子可以與BCA(Bicinchoninicacid)試劑結(jié)合,終生成紫色的復(fù)合物。該復(fù)合物在562nm處有很強(qiáng)的吸收峰。復(fù)合物的多少與蛋白質(zhì)的濃度呈接近的線性關(guān)系。
  
  ?一、BCA蛋白試劑盒有許多優(yōu)點(diǎn):
  1、檢測的靈敏度高,檢測的蛋白質(zhì)濃度下限可達(dá)20μg/mL。
  2、線性范圍廣,在20-2000μg/mL的范圍內(nèi),呈接近的線性關(guān)系。
  3、兼容性良好,產(chǎn)品可以兼容的化學(xué)物質(zhì)非常廣泛。
  
  二、使用方法:
  1、BCA工作液的配制
 ?。?)BCA工作液總體積的計(jì)算:
  BCA工作液總體積=(標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量+待測樣品數(shù)量+1)×重復(fù)數(shù)×200μL。
  舉例:如果標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量為8,待測樣品數(shù)量1,重復(fù)數(shù)為3,則BCA工作液總體積=(8+1+1)×3×200μL=6000μL
  (2)BCA工作液的配制:按50體積的BCA試劑A中加入1體積的BCA試劑B(A:B=50:1),充分混勻。
  舉例:將5000μL的BCA試劑A與100μL的BCA試劑B混合,得到5100μL的BCA工作液。
  
  2、BSA標(biāo)準(zhǔn)品的配制
  將BSA標(biāo)準(zhǔn)品做系列稀釋,分別得到如下9個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品:2000μg/mL,1500μg/mL,1000μg/mL,500μg/mL,250μg/mL,125μg/mL,62.5μg/mL,31.25μg/mL,0μg/mL。
  注:嚴(yán)格的蛋白定量,BSA標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋溶液應(yīng)該與待測蛋白樣品的溶液相同。但是一般情況下,BSA標(biāo)準(zhǔn)品可以直接用0.9%的NaCl、PBS或者去離子水進(jìn)行稀釋。
  
  3、取BSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品各25μL到96孔板孔內(nèi),
  注:正常情況下,樣品與BCA工作液的體積之比應(yīng)為1:8。如果樣品體積有限,也可使用10μLBSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品進(jìn)行檢測(即樣品與BCA工作液的體積之比為1:20),這時(shí)BCA定量試劑盒的檢測范圍較小為125-2000μg/mL。
  
  4、往每孔中加入200μL的BCA工作液,蓋上96孔板蓋子。
  
  5、將96孔板放37℃,30分鐘。
  
  6、用酶標(biāo)儀測562nm處的光吸收值。
  注:562nm為*的光吸收波長。如果無法檢測562nm處的光吸收值,也可以在540~595nm波長范圍內(nèi)檢測光吸收值。
  
  7、根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的光吸收值(扣除空白孔的光吸收值即為終的讀數(shù)),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測樣品的蛋白濃度。
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